针对AB品系斑马鱼，提供基于碱基编辑器（BE）的单碱基定点突变定制服务，实现目标基因特定位点的单碱基精准替换（如C→T、A→G），构建可稳定遗传的突变模型。
一、服务流程
- 1. 靶点设计与验证
- 2. 编辑载体构建
- 3. 受精卵显微注射
- 4. F0代基因型鉴定（PCR扩增+Sanger测序，验证单碱基替换效率）
- 5. F1代传代筛选鉴定（筛选出“目标单碱基精准替换”的杂合个体）
- 6. 成果交付
二、服务周期
整体服务周期约6-9个月（含斑马鱼性成熟周期），其中F0代鉴定约2-3月，F1代筛选约3-4月，确保交付可稳定遗传的F1代杂合品系。
三、服务价格
单个碱基定点突变模型构建：¥33980元/个
四、结果交付
- ・ 至少1对F1代杂合突变成鱼，可直接用于交配扩繁；
- ・ 完整实验报告（含靶点设计、碱基编辑效率检测、PCR/测序鉴定结果、基因型统计分析数据）。
五、核心优势
- 精准编辑：实现目标位点单碱基精准替换，显著降低随机插入/缺失突变风险，无额外序列改变；
- 安全低风险：无需基因组双链断裂（DSB），减少染色体重排等副效应，脱靶风险低；
- 稳定可遗传：突变稳定整合至基因组，可高效获得F1代可稳定遗传突变品系；
- 靶向性强：依托sgRNA 精准靶向，大幅降低非特异性编辑概率。
六、质量标准
- 品系质控：F1代杂合子可稳定遗传；
- 测序验证：目标突变位点及Sanger 测序验证结果与客户要求一致。
七、应用前景
- ・ 单碱基遗传病模型构建
- ・ 关键基因功能位点验证
- ・ 致病突变机制解析
- ・ 临床前药物筛选
- ・ 精准医疗靶点验证
- ・ 功能基因组学与转化医学研究
八、案例展示
通过 zAncBE4max 碱基编辑技术对斑马鱼twist2基因进行精准 C-to-T 编辑，首次证实其可将致病位点 GAG（谷氨酸）精准转换为 AAG（赖氨酸，E78K 突变），模拟人类无眼睑 - 巨口综合征（AMS）的分子病理。该发现为单碱基突变遗传病的机制研究提供了全新模型解析，并成功构建了从胚胎期到成年期的完整疾病表型谱，为 AMS 及相关单碱基突变疾病的机制研究与干预策略开发奠定了突破性技术基础。
图示: 利用单碱基突变技术构建 AMS 斑马鱼模型
a：展示twist2基因 E78K 突变的精准编辑靶点，实现 GAG→AAG（E→K）单碱基转换。
b：测序峰图显示目标位点 C→T 精准转换，无 indel 或非预期突变，验证编辑特异性。
c：48 hpf 纯合突变体胚胎表现躯干短小、尾部弯曲，与野生型形成表型差异，15dpf全部致死。
d：6 个月杂合突变体出现下颌前突、口腔未闭、身体消瘦，复现人类 AMS 疾病表型。
参考文献
Zhao, Y., Shang, D., Ying, R., Cheng, H., & Zhou, R. (2020). An optimized base editor with efficient C-to-T base editing in zebrafish. BMC Biology, 18, 190.
