一、服务简介
以AB品系斑马鱼为模型，提供基于RNA靶向的单基因瞬时敲降模型构建，可短期高效下调蛋白表达，适用于基因功能快速验证与表型关联分析等，满足无需构建稳定遗传品系、仅需短期功能抑制的研究需求。
二、服务流程
- 1. sgRNA设计与验证
- 2. 注射体系配制（CasRX 蛋白/mRNA与sgRNA）
- 3. 胚胎显微注射
- 4. 胚胎培养与敲降效率检测
- 5. 表型观察与数据整理
- 6. 出具完整实验报告
三、服务周期
全程实验周期约1个月：注射后24-48h可检测mRNA 的敲低效率，后续1-2周为表型观察的关键时间节点。
四、服务价格
单个基因瞬时敲降模型构建：¥9980元/个
五、结果交付
最终交付完整的斑马鱼基因瞬时敲降实验数据报告，包含 sgRNA设计、胚胎注射及存活率统计、目标基因敲降效率检测结果、表型观察记录与分析，以及全套实验原始数据等。
六、核心优势
- 无基因组修饰：基于CasRX系统靶向mRNA降解，不改变基因组，无遗传背景干扰
- 实验周期短：约1个月即可完成全流程，远快于稳定遗传编辑
- 靶向特异性高：优化sgRNA设计降低脱靶风险，脱靶仅存在于RNA水平，无基因组层面的非特异性修饰
七、质量标准
- sgRNA 质控：琼脂糖凝胶电泳验证完整性，OD260/280比值为1.8-2.0，确保纯度符合实验要求。
- 转录水平验证：注射后24-48h，通过RT-qPCR对目标基因mRNA进行定量分析，评估敲降效率。
- 表型功能验证：观察胚胎发育过程表型变化，验证敲降后功能效应。
八、应用前景
- ・ 发育生物学机制解析
- ・ 疾病相关基因功能验证
- ・ 药物靶点快速筛选
- ・ 信号通路初步探究
九、案例展示
ldlrap1a基因敲降的有效性验证，将ldlrap1a-KD-sgRNA、CasRx-mRNA注射至Tg (cryaa：EGFP)的F1代斑马鱼中，对照组为CasRx，实验组为CasRx+ (ldlrap1a-sgRNA)。结果显示，实验组中各时间节点的ldlrap1a基因的表达水平均降低，表明敲降模型构建成功。
RecOFAR 介导基于双切口的斑马鱼多位点高效基因敲入（KI）
（A）72 hpf对应绿色荧光背景下表型图；（B）72 hpf的晶状体平均荧光强度统计；（C）72 hpf的晶状体面积统计。图中标尺为0.5 mm，n=20。
